ODC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401055

概要

ODC1はオルニチン脱炭酸酵素（ODC）をコードしており、オルニチンをプトレシンに変換することでポリアミン生合成における律速段階を担う酵素です。これにより、DNA複製、クロマチン構造の制御、翻訳に必要なスペルミジンおよびスペルミンの産生が支えられます。ODC活性はアンチザイムによる分解を介して厳密に制御され、アミノ酸代謝、mTORに連動した増殖シグナル伝達、細胞周期の進行と統合されています。ポリアミン代謝の破綻やODC1発現の上昇は、増殖性表現型、代謝適応、腫瘍性の転写プログラムとしばしば関連しており、ODC1は増殖制御やストレス応答を研究する上で有用な結節点となります。さらにODC1の撹乱は、ポリアミンが遺伝子発現や細胞の適応度を調節するアポトーシス、酸化ストレスの緩衝、免疫／炎症シグナル伝達に関する研究にも示唆を与えます。

ODC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるODC1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ODC1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ODC1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ODCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ODCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ODC1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ODCの機能に不可欠なODC1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ODC1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ODC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびODC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ODC1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ODC HDRプラスミド（h）および ODC HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはODC1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のODC1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。