OCT3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402959-ACT

SLC22A3 codifica o transportador de cátions orgânicos 3 (OCT3), um transportador de solutos poliespecífico da membrana plasmática que medeia o transporte bidirecional de monoaminas endógenas e de diversos cátions orgânicos xenobióticos de forma independente de sódio. O OCT3 influencia a captação celular e a depuração de catecolaminas e outras aminas bioativas, moldando a homeostase de neurotransmissores, a sinalização de estresse e o tônus inflamatório local em tecidos como cérebro, coração, fígado e placenta. Ao regular a exposição intracelular a metabólitos e fármacos catiônicos, o OCT3 impacta processos de transporte de membrana, a bioenergética celular e a variabilidade farmacocinética. Alterações na expressão de SLC22A3 ou variações genéticas têm sido associadas a fenótipos cardiometabólicos e neuropsiquiátricos e podem modular a suscetibilidade a doenças complexas por meio de mudanças no manejo de monoaminas e na atividade do transportador de forma específica por tecido.

OCT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC22A3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OCT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC22A3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC22A3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OCT3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC22A3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OCT3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OCT3 em células tumorais com expressão de SLC22A3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.