OATP8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402371-ACT

SLCO1B3は、ヒト有機アニオン輸送ポリペプチドOATP8（OATP1B3）をコードしており、ナトリウム非依存的に多様な内因性・外因性の有機アニオンを細胞内へ取り込む膜流入トランスポーターです。本遺伝子は、胆汁酸、ビリルビン抱合体、ステロイドホルモン代謝物、ならびに多数の薬物様化合物に対する細胞曝露を規定する肝臓および上皮における輸送過程と密接に関わり、解毒や代謝クリアランス経路に影響を及ぼします。SLCO1B3の発現変動や細胞内での局在異常は、細胞内基質の利用可能性とそれに続くシグナル伝達を再構築し、異物応答、酸化ストレス制御、代謝恒常性に関連する下流経路へ影響し得ます。OATP1B3の異常活性や異所性発現パターンは複数のがんおよび肝関連疾患で報告されており、トランスポーター制御性の表現型やファーマコゲノミクスにおける個人差を機序的に解析するための有用な標的となっています。

OATP8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLCO1B3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OATP8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLCO1B3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLCO1B3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OATP8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLCO1B3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOATP8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLCO1B3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOATP8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。