OAS3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405992-ACT

A OAS3 humana (2′-5′-oligoadenilato sintetase 3) é uma enzima estimulada por interferon que detecta RNA de dupla fita viral e celular e catalisa a síntese de oligoadenilatos com ligações 2′-5′. Esses segundos mensageiros ativam a RNase L, promovendo a degradação direcionada de RNA e moldando programas de sinalização da imunidade inata que se intersectam com a restrição antiviral, a transcrição inflamatória e respostas ao estresse. A atividade da OAS3 integra-se a vias reguladas por interferon/JAK–STAT e contribui para o controle celular da homeostase de RNA durante a infecção. A sinalização OAS3–RNase L desregulada tem sido investigada no contexto de suscetibilidade à infecção viral, assinaturas de interferon aberrantes e estados de doença inflamatória.

OAS3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OAS3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OAS3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OAS3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OAS3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OAS3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OAS3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OAS3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OAS3 em células tumorais com expressão de OAS3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.