Nup88 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404091-ACT

NUP88 codifica a Nup88, um componente central do complexo do poro nuclear que contribui para o transporte nucleocitoplasmático ao organizar a face citoplasmática do poro e ao sustentar o tráfego regulado de proteínas e RNAs. Por meio de interações com outras nucleoporinas e receptores de transporte, a Nup88 ajuda a manter a permeabilidade do envelope nuclear e influencia a progressão do ciclo celular, as respostas ao estresse e a regulação gênica dependente de sinais. Alterações na expressão ou na localização de NUP88 têm sido associadas a uma dinâmica de transporte desregulada e ao controle aberrante de programas de proliferação e diferenciação. Essas características tornam o NUP88 um alvo relevante para estudos mecanísticos de vias de transporte nuclear e de suas conexões com a regulação do genoma em células humanas.

Nup88 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NUP88 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nup88 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NUP88 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NUP88, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nup88. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NUP88 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nup88 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nup88 em células tumorais com expressão de NUP88 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.