Plásmido CRISPR de Activación (h) Nup107: sc-405252-ACT

NUP107 codifica Nup107, un componente central del subcomplejo Nup107–160 del complejo del poro nuclear, que facilita el transporte núcleo–citoplasmático de proteínas y ARN. Más allá de actuar como compuerta del transporte, Nup107 contribuye a la organización de la envoltura nuclear, la progresión mitótica y el ensamblaje del huso, vinculando el tráfico nucleocitoplasmático con el control del ciclo celular y las vías de estabilidad del genoma. La alteración de la arquitectura del poro nuclear y de la selectividad del transporte puede reconfigurar programas transcripcionales y respuestas al estrés, lo que convierte a NUP107 en un nodo útil para estudiar la regulación dependiente del transporte nuclear. La función alterada de las nucleoporinas se ha asociado con fenotipos del desarrollo y estados celulares relacionados con el cáncer, aportando relevancia mecanística para la investigación biomédica centrada en la proliferación y la homeostasis nuclear.

Nup107 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NUP107 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nup107 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NUP107 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NUP107, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nup107. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NUP107 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nup107 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nup107 en células tumorales con expresión de NUP107 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.