NTF2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405048-ACT

O gene humano **NUTF2** codifica o fator de transporte nuclear 2 (**NTF2**), um mediador-chave do transporte nucleocitoplasmático que dá suporte à importação nuclear ao regular o ciclo da GTPase Ran e facilitar a translocação de RanGDP através do complexo do poro nuclear. Ao manter o gradiente RanGTP/RanGDP, o NTF2 influencia processos amplos, incluindo a progressão do ciclo celular, respostas ao estresse e a localização nuclear de proteínas regulatórias e de RNAs. Alterações na dinâmica do transporte nuclear e desequilíbrios na via de Ran são frequentemente observados em contextos de doenças proliferativas e neurodegenerativas, tornando o NUTF2 um alvo útil para dissecar sinalização e regulação gênica dependentes de transporte. A função do NTF2 também é relevante para estudos de biologia do poro nuclear e de interações hospedeiro–patógeno que exploram o tráfego nuclear.

NTF2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NUTF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NTF2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NUTF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NUTF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NTF2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NUTF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NTF2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NTF2 em células tumorais com expressão de NUTF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.