NT-3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421978-ACT
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- NT-3 CRISPR Activationプラスミド (m)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- NT-3 CRISPR Activationプラスミド (m)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- NT-3 CRISPR活性化プラスミド（m）およびNT-3 CRISPR活性化プラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ntf3転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
NT-3 CRISPR Activationプラスミド (m) | sc-421978-ACT | 20 µg | $397.00 |
マウスのNtf3は、神経栄養因子3（neurotrophin-3：NT-3）をコードしており、発生期および成体組織において、神経細胞の生存、分化、シナプス結合性を制御する分泌性の増殖因子です。NT-3は主に受容体型チロシンキナーゼであるTRKC/NTRK3受容体を介してシグナルを伝達し、MAPK/ERK、PI3K–AKT、PLCγの各カスケードを活性化することで、軸索誘導、神経突起伸長、活動依存的可塑性の形成に関与します。神経系以外でも、NT-3は固有受容感覚回路の形成や末梢神経の維持に影響し、組織微小環境における神経—免疫相互作用を調節し得ます。神経栄養因子シグナルの破綻は、神経発達表現型、神経変性、神経損傷応答の研究において重要であり、栄養因子による支持の変化や受容体下流経路のバランスの変動が、細胞運命や結合性に影響します。
NT-3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ntf3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
NT-3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ntf3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNtf3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NT-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNtf3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNT-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNtf3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNT-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。