NT-3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401458-ACT

ニューロトロフィン3（NTF3）は、分泌型ニューロトロフィンであるNT-3をコードしており、発生期および成人組織の維持において、神経細胞の生存、神経突起の伸長、シナプス成熟を制御する重要な調節因子です。NT-3は主としてNTRK3/TrkCを介してシグナルを伝達し、MAPK/ERK、PI3K–AKT、PLCγ経路を活性化することで、栄養因子による支持を活動依存的な可塑性や分化プログラムと統合します。神経系以外でも、NTF3依存的シグナルは、遺伝子発現や細胞骨格ダイナミクスの調節を通じて、軸索誘導、感覚ニューロン機能、神経免疫相互作用に影響を及ぼします。NT-3/TrkC軸の活性変化を含むニューロトロフィンシグナルの破綻は、神経発達に関連する表現型や、神経変性および神経障害性疼痛の生物学に関わる機序と関連づけられています。

NT-3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NTF3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NT-3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NTF3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNTF3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NT-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNTF3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNT-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNTF3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNT-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。