NRSF Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-418578-NIC

REST, também conhecido como fator silenciador restritivo de neurônios (NRSF), é um repressor transcricional do tipo dedo de zinco que se liga a sítios do elemento repressor-1 (RE1/NRSE) para silenciar programas gênicos neuronais em células não neuronais e modular a maturação neuronal. Por meio do recrutamento de complexos correpressores como SIN3/HDAC e CoREST/LSD1, o REST remodela a cromatina para regular genes sinápticos, canais iônicos e vias neurosecretórias, influenciando diferenciação, excitabilidade e respostas ao estresse. O controle transcricional dependente de REST se cruza com a regulação epigenética e a sinalização dependente de atividade, contribuindo para mudanças específicas do contexto na identidade celular e na plasticidade. A atividade desregulada de REST/NRSF tem sido associada a mecanismos do neurodesenvolvimento e da neurodegeneração, bem como a programas aberrantes de repressão transcricional observados em múltiplos contextos tumorais, sustentando seu uso como um ponto nodal para o estudo de redes de regulação gênica.

NRSF O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus REST em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de REST. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função REST. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com REST interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.