Nrf3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-404543-LAC

O NFE2L3 humano codifica o fator de transcrição CNC-bZIP Nrf3, um regulador de programas de expressão gênica que coordenam a homeostase redox celular, a proteostase e a adaptação metabólica. O Nrf3 participa de redes transcricionais responsivas ao estresse relacionadas a elementos de resposta antioxidante e se integra a vias que controlam a função do retículo endoplasmático e a regulação do sistema ubiquitina–proteassoma. Ao modular a expressão basal e induzível de genes de desintoxicação e de controle de qualidade, o Nrf3 pode influenciar a proliferação, a diferenciação e a sinalização inflamatória de maneira dependente do contexto. A atividade desregulada de NFE2L3/Nrf3 tem sido implicada na biologia do câncer e em outros distúrbios ligados ao estresse oxidativo e à proteostase alterada, apoiando estudos mecanísticos de adaptação ao estresse e controle transcricional.

As Partículas de Ativação Lentivirais Nrf3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de NFE2L3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Nrf3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição NFE2L3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Nrf3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo NFE2L3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.