Nrf3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404543-ACT

O NFE2L3 humano codifica o fator de transcrição CNC-bZIP Nrf3, membro da família cap ‘n’ collar, que coordena programas de expressão gênica ligados à adaptação ao estresse celular e à homeostase tecidual. O Nrf3 integra sinais de redox e de proteostase para modular redes transcricionais envolvidas em metabolismo, diferenciação e regulação do sistema ubiquitina–proteassoma, em interseção com a sinalização associada ao elemento de resposta antioxidante (ARE). Por meio dessas vias, o Nrf3 contribui para o controle dependente do contexto da proliferação e da sobrevivência e é frequentemente estudado por sua expressão ou atividade alteradas na biologia do câncer e em outros distúrbios caracterizados por desregulação da sinalização de resposta ao estresse. Sua atividade transcricional nuclear torna o NFE2L3 um nó útil para mapear circuitos regulatórios que conectam o estresse ambiental à remodelação transcricional em escala genômica.

Nrf3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NFE2L3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nrf3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NFE2L3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NFE2L3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nrf3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NFE2L3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nrf3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nrf3 em células tumorais com expressão de NFE2L3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.