Particules Lentivirales d'Activation (h) Nrf2: sc-400017-LAC

Le gène humain NFE2L2 code le facteur de transcription Nrf2, un régulateur maître de l’homéostasie redox cellulaire et de la défense contre les électrophiles. En situation de stress oxydatif ou xénobiotique, Nrf2 s’accumule et se lie aux éléments de réponse antioxydante (ARE) afin d’induire des gènes cytoprotecteurs impliqués dans la synthèse du glutathion, la régénération du NADPH, la détoxification et la protéostasie. Cette voie s’intègre au renouvellement médié par KEAP1 via le système ubiquitine–protéasome et interagit avec les signalisations inflammatoires et métaboliques, influençant la fonction mitochondriale et l’autophagie. Une signalisation Nrf2 dérégulée a été associée à une résilience au stress altérée dans des contextes tels que la carcinogenèse, la neurodégénérescence et les états inflammatoires chroniques, ce qui motive des études mécanistiques de la dynamique d’activation de la voie.

Les particules d'activation lentivirales Nrf2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NFE2L2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Nrf2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NFE2L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Nrf2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NFE2L2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.