NQO1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400326-ACT

A NQO1 humana (NAD(P)H quinona desidrogenase 1) é uma flavoproteína citosólica que catalisa a redução de quinonas a hidroquinonas por um mecanismo de dois elétrons, limitando o ciclo redox e a geração de espécies reativas de oxigênio. Atua como um componente-chave dos programas celulares de desintoxicação e de defesa antioxidante, interagindo com o metabolismo de xenobióticos e com as respostas ao estresse oxidativo reguladas por NRF2/KEAP1. Ao modular o estado redox celular e o metabolismo de quinonas, a NQO1 influencia a estabilidade de proteínas e a sinalização adaptativa ao estresse que molda a proliferação e a sobrevivência sob desafios eletrofílicos ou oxidativos. Alterações na expressão e na atividade da NQO1 têm sido associadas à variabilidade na sensibilidade a agentes químicos e ao desequilíbrio redox observados em diversos contextos relevantes para doenças, incluindo a biologia do câncer e modelos de estresse inflamatório.

NQO1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NQO1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NQO1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NQO1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NQO1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NQO1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NQO1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NQO1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NQO1 em células tumorais com expressão de NQO1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.