NPC1L1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401741-ACT

NPC1L1 (Niemann-Pick C1-like 1) codifica um transportador de esteróis de membrana multipasso que medeia a captação intestinal e hepática do colesterol da dieta e de outros esteróis lipofílicos. Localiza-se principalmente na membrana apical e recircula por endocitose, ligando o tráfego de membranas às vias de deteção de esteróis e de homeostase lipídica. A atividade de NPC1L1 influencia a disponibilidade intracelular de colesterol e a regulação a jusante de programas metabólicos lipídicos controlados por SREBP. A absorção de esteróis dependente de NPC1L1, quando desregulada, é frequentemente estudada no contexto de hipercolesterolemia, disfunção metabólica e biologia relacionada com a aterosclerose.

NPC1L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NPC1L1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NPC1L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NPC1L1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NPC1L1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NPC1L1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NPC1L1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NPC1L1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NPC1L1 em células tumorais com expressão de NPC1L1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.