Plásmido CRISPR de Activación (h) NP2: sc-403815-ACT

NPTX2 codifica la pentraxina neuronal‑2 (NP2), una proteína sináptica secretada implicada en la remodelación sináptica dependiente de la actividad y en la maduración de los circuitos excitatorios. NP2 participa en vías reguladas por la actividad neuronal que influyen en el agrupamiento de receptores sinápticos y en las interacciones con la matriz extracelular, apoyando procesos como la sinaptogénesis, la plasticidad y la estabilidad de la red. La alteración de la expresión de NPTX2 se ha vinculado a la biología de enfermedades neurodegenerativas y neuropsiquiátricas, en las que la disfunción sináptica y el desequilibrio entre excitación e inhibición son rasgos frecuentes. Como lectura molecular de la actividad neuronal y de la integridad sináptica, NP2 se estudia ampliamente en modelos de remodelación de circuitos, respuestas al estrés y cambios sinápticos asociados a la inflamación.

NP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NPTX2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NPTX2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NPTX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NPTX2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NP2 en células tumorales con expresión de NPTX2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.