Notch1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-421930-NIC

O Notch1 de camundongo codifica um receptor transmembrana de passagem única que medeia a sinalização canônica de Notch para controlar decisões de destino celular, a manutenção de células-tronco e progenitoras e programas de diferenciação durante o desenvolvimento e a homeostase tecidual. A ligação ao ligante desencadeia o processamento proteolítico e a liberação do domínio intracelular de Notch, que se transloca para o núcleo e coopera com RBPJ/CSL e coativadores como MAML para regular redes transcricionais, incluindo alvos das famílias HES e HEY. O Notch1 integra-se a vias que governam proliferação, apoptose e comprometimento de linhagem, e sua desregulação está associada a alterações no desenvolvimento de células imunes e a processos tumorigênicos em múltiplos tecidos. Em modelos murinos, a perturbação de Notch1 é amplamente utilizada para investigar fenótipos do desenvolvimento, a regulação hematopoética e sinais do microambiente que moldam a organização tecidual.

Notch1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Notch1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Notch1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Notch1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Notch1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.