Notch1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400167-ACT

O NOTCH1 humano codifica o recetor transmembranar Notch1, um mediador central da sinalização Notch juxtácrina que regula decisões de destino celular, proliferação e diferenciação durante o desenvolvimento e a homeostase tecidular. A ligação do ligando desencadeia o processamento proteolítico e a libertação do domínio intracelular de Notch, que se transloca para o núcleo para regular programas transcricionais que controlam a especificação de linhagens e a manutenção de células estaminais/progenitoras. A atividade de Notch1 cruza-se com vias como WNT/β-catenina, NF-κB, PI3K–AKT e TGF-β para coordenar saídas transcricionais dependentes do contexto. A desregulação da sinalização de NOTCH1 está implicada na biologia do cancro, no desenvolvimento de células imunitárias e em processos cardiovasculares e do neurodesenvolvimento, sustentando a sua ampla relevância em estudos mecanísticos.

Notch1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOTCH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Notch1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOTCH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOTCH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Notch1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOTCH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Notch1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Notch1 em células tumorais com expressão de NOTCH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.