Notch 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401323-ACT

O NOTCH2 codifica o Notch 2, um receptor transmembranar de passagem única que medeia a sinalização juxtácrina, controlando decisões de destino celular, comprometimento de linhagem e homeostase tecidual. Após a ligação ao ligante (por exemplo, JAGGED/Delta-like), o processamento proteolítico libera o domínio intracelular de Notch, que regula a transcrição em conjunto com CSL/RBPJ e coativadores, integrando-se a vias como Wnt, TGF-β e NF-κB. A atividade de Notch 2 influencia o equilíbrio entre proliferação e diferenciação, a manutenção de células-tronco/progenitoras e o desenvolvimento de células imunes, com efeitos dependentes do contexto em diferentes sistemas de órgãos. A desregulação da sinalização de NOTCH2 está associada a distúrbios do desenvolvimento e tem sido implicada em processos oncogênicos e inflamatórios, sustentando seu estudo em diferenciação, sinalização do microambiente e modelagem de doenças.

Notch 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOTCH2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Notch 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOTCH2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOTCH2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Notch 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOTCH2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Notch 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Notch 2 em células tumorais com expressão de NOTCH2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.