NOSIP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404767-ACT

ヒトNOSIP（nitric oxide synthase interacting protein：一酸化窒素合成酵素相互作用タンパク質）は、eNOSやnNOSを含む一酸化窒素合成酵素（NOS）に結合し、一酸化窒素（NO）の産生および下流のcGMP依存性シグナル伝達を調節する制御アダプターです。NOSの輸送（トラフィッキング）、複合体形成、活性に影響することで、NOSIPは血管トーヌスの調節、神経シグナル伝達、免疫関連のNO応答といった細胞プロセスを形作る可能性があります。NOS–NOSIP相互作用の異常は、酸化還元バランスや炎症性シグナル伝達の変化と関連していることが報告されており、NOSIPは心血管および神経炎症表現型に関与する経路を検討するうえで有用な標的となります。NOSIPの発現と機能を研究することは、ヒト細胞においてNOの生物学的利用能が、ストレス応答やサイトカイン連関型のシグナルネットワークとどのように統合されるかを明らかにする助けになります。

NOSIP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NOSIPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NOSIP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NOSIP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNOSIP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NOSIPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNOSIP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNOSIP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNOSIP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNOSIP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。