NOR-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401813-ACT

NR4A3 codifica o NOR-1, um receptor nuclear órfão que atua como fator de transcrição de resposta imediata, integrando sinais mitogênicos e de estresse em programas gênicos dependentes do contexto. O NOR-1 influencia a diferenciação, a proliferação, a apoptose e a adaptação metabólica celulares ao modular redes transcricionais a jusante de vias como MAPK/ERK e cAMP/PKA, com comunicação cruzada com a sinalização inflamatória. Em células imunes e vasculares, o NR4A3 contribui para a regulação da expressão gênica responsiva a citocinas e para a mudança fenotípica, sustentando estudos sobre inflamação, angiogênese e remodelamento tecidual. Alterações na atividade do NR4A3 e a reprogramação transcricional têm sido associadas a processos oncogênicos e hematológicos, tornando-o um nó útil para investigar circuitos regulatórios de genes relevantes para doenças.

NOR-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NR4A3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NOR-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NR4A3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NR4A3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NOR-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NR4A3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NOR-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NOR-1 em células tumorais com expressão de NR4A3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.