Nolz-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405058-ACT

O ZNF503 humano codifica o fator de transcrição com dedo de zinco Nolz-1, um regulador nuclear que molda programas de expressão gênica responsáveis pela especificação do destino celular, diferenciação e padronização tecidual. A atividade de Nolz-1 é comumente estudada no contexto de redes de repressão/ativação transcricional e de interações (crosstalk) entre vias de sinalização do desenvolvimento que influenciam o comprometimento de linhagem e a morfogênese. A expressão desregulada de ZNF503 tem sido associada a estados de diferenciação alterados e fenótipos proliferativos em múltiplos cenários de pesquisa de doenças, incluindo biologia do câncer e modelos de neurodesenvolvimento. Como regulador de ligação ao DNA, Nolz-1 constitui um ponto acessível para dissecar entradas regulatórias a montante e alvos transcricionais a jusante que controlam a identidade celular.

Nolz-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZNF503 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nolz-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZNF503 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZNF503, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nolz-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZNF503 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nolz-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nolz-1 em células tumorais com expressão de ZNF503 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.