Nogo Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427106
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Nogo O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Nogo, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Nogo Anticorpo (C-4): sc-271878
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Nogo Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-427106 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Rtn4 codifica a Nogo, uma reticulona associada ao retículo endoplasmático que molda as membranas tubulares do RE e contribui para a homeostase de organelas em neurônios e células da glia. As isoformas de Nogo também influenciam o crescimento de neuritos e a plasticidade sináptica ao modular a dinâmica do citoesqueleto e vias de sinalização ligadas ao direcionamento e à regeneração axonal. No sistema nervoso central, a inibição da extensão de neuritos mediada por Nogo é relevante para mecanismos que limitam a remodelação neuronal após lesão e durante a neurodegeneração. Por isso, o Rtn4/Nogo de camundongo é amplamente estudado em modelos de controle do crescimento axonal, sinalização associada à mielinização e respostas ao estresse acopladas à estrutura do RE.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Nogo (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rtn4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rtn4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rtn4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Nogo.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rtn4 para a investigação da sinalização de Nogo, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rtn4 críticos para a função Nogo
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rtn4 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Nogo Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Nogo Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rtn4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Nogo Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Nogo (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rtn4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rtn4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.