Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nodal: sc-401439-ACT

Le gène humain **NODAL** code le morphogène sécrété **Nodal**, un ligand de la superfamille **TGF-β** qui transmet son signal via les récepteurs de l’activine et **SMAD2/3** afin de réguler la spécification des feuillets embryonnaires, la formation des axes et le maintien de programmes transcriptionnels du développement. L’activité de Nodal est étroitement contrôlée par des boucles de rétroaction impliquant des antagonistes tels que les protéines **LEFTY**, ainsi que par des interactions avec les voies **WNT** et **FGF**, orientant les décisions de destin cellulaire et les transitions épithélio-mésenchymateuses. Une réactivation aberrante de la voie **NODAL** a été associée à des états de différenciation modifiés et à des phénotypes invasifs dans plusieurs contextes tumoraux, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des modèles du développement et de la maladie. En tant que ligand de voie de signalisation, Nodal constitue un marqueur facilement exploitable pour étudier la signalisation paracrine, la transcription dépendante des SMAD et la plasticité de lignée dans des systèmes cellulaires humains.

Nodal Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NODAL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nodal Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NODAL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NODAL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nodal. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NODAL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nodal au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nodal dans les cellules tumorales présentant une expression de NODAL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.