NOD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402402-ACT

NOD1 (domínio de oligomerização com ligação a nucleotídeos contendo 1) é um recetor citosólico de reconhecimento de padrões que deteta muropeptídeos derivados do peptidoglicano, particularmente o ácido γ-D-glutamil-meso-diaminopimélico de bactérias Gram-negativas. Após o reconhecimento do ligando, o NOD1 sinaliza através de RIPK2 para ativar as vias NF-κB e MAPK, promovendo a transcrição de mediadores inflamatórios e modulando a barreira epitelial e as respostas imunitárias inatas. O NOD1 também se cruza com a autofagia, a sinalização de stress e as interações hospedeiro–microbioma que influenciam a sobrevivência celular e a homeostase imunitária. A atividade desregulada de NOD1 tem sido associada a estados inflamatórios crónicos e a patologia relacionada com infeções, sustentando o seu estudo em redes de sinalização imunitária e em modelos de inflamação relevantes para a doença.

NOD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NOD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NOD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NOD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NOD1 em células tumorais com expressão de NOD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.