Nocturnin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405350-LAC

Il gene umano **NOCT** codifica **Nocturnin**, una deadenilasi di tipo CCR4 regolata dal ritmo circadiano, che modula la lunghezza della coda poli(A) degli mRNA per controllare la stabilità dei trascritti e la traduzione in modo dipendente dall’ora del giorno. Nocturnin integra i segnali dell’orologio circadiano con i programmi metabolici, influenzando la gestione dei lipidi, la funzione mitocondriale e l’espressione genica responsiva ai nutrienti in diversi tipi cellulari. Attraverso la regolazione post-trascrizionale, modella vie collegate all’omeostasi energetica, alla segnalazione infiammatoria e all’adattamento cellulare allo stress. Un’espressione o attività deregolata di **NOCT** è stata associata a fenotipi metabolici e ad alterazioni del controllo della crescita in contesti rilevanti per la malattia, stimolando studi meccanicistici su come il turnover ritmico dell’RNA influenzi la patologia.

Le particelle di attivazione lentivirale Nocturnin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NOCT in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Nocturnin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NOCT, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Nocturnin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NOCT e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.