NKG2-D CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424169

概要

Klrk1 は、活性化型免疫受容体 NKG2-D（KLRK1）をコードしており、これはマウスの NK 細胞および CD8+ T 細胞の一部サブセットに発現する II 型膜貫通性の C 型レクチン様受容体です。NKG2-D はストレス誘導性リガンドを認識し、アダプタータンパク質を介してシグナルを伝達することで、PI3K、Vav1、Syk/ZAP70 に連結した経路を起動し、細胞傷害性顆粒の放出、サイトカイン産生、ならびに免疫監視を促進します。この軸は、DNA 損傷、感染、細胞の形質転換からのシグナルを統合し、自然免疫および獲得免疫のエフェクター応答を形成します。実験モデルでは、NKG2-D とリガンドの相互作用の破綻（調節異常）が、腫瘍の免疫回避、慢性炎症、ならびにウイルス感染組織やストレスを受けた組織の制御異常に関与することが示唆されています。

NKG2-D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるKlrk1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Klrk1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Klrk1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NKG2-Dタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NKG2-Dシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Klrk1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NKG2-Dの機能に不可欠なKlrk1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Klrk1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NKG2-D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNKG2-D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Klrk1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NKG2-D HDRプラスミド（m）および NKG2-D HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKlrk1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKlrk1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。