Partículas Lentivirales de Activación (m) NKCC1: sc-422971-LAC

Slc12a2 codifica el cotransportador Na⁺-K⁺-2Cl⁻ NKCC1, un transportador electroneutro de amplia expresión que acopla los gradientes de sodio y potasio a la entrada de cloruro, regulando así la homeostasis intracelular de Cl⁻, el volumen celular y la secreción de fluidos epiteliales. En tejidos de ratón, NKCC1 contribuye al movimiento de iones y agua a través de los epitelios, influye en la excitabilidad neuronal mediante la señalización GABAérgica dependiente de cloruro y sostiene respuestas secretoras y al estrés osmótico. La actividad de NKCC1 se integra con la señalización de quinasas WNK–SPAK/OSR1 e interactúa funcionalmente con los cotransportadores KCC para establecer los niveles celulares de cloruro. La desregulación de los procesos de transporte vinculados a NKCC1 se ha asociado con edema y disfunción de barrera, alteración de la actividad de redes neuronales y fisiopatología relacionada con desequilibrios de sal y agua, lo que convierte a Slc12a2 en una diana relevante para estudios mecanísticos de biología del transporte.

Las partículas de activación lentiviral NKCC1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Slc12a2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral NKCC1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Slc12a2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de NKCC1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Slc12a2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.