Nix Double Nickaseプラスミド (h): sc-401982-NIC

BNIP3LはNixをコードする遺伝子であり、Nixはミトコンドリア外膜に局在するBH3-onlyタンパク質です。Nixは低酸素や細胞ストレスのシグナルを、プログラムされたミトコンドリアのターンオーバー（選択的除去）と結び付けます。NixはLC3結合領域（LC3-interacting region）を介してミトコンドリアの選択的オートファジーを促進し、PINK1/Parkin非依存的なマイトファジー機構とも協調して、分化やストレス適応の過程におけるミトコンドリア品質管理を支えます。さらに、ミトコンドリア膜電位、ROS恒常性、BCL2ファミリーとの相互作用を調節することで、Nixは内因性アポトーシスや代謝リモデリングにも影響を与えます。BNIP3L/Nix活性の破綻は、神経変性、心代謝ストレス、がん生物学などの文脈で、マイトファジーの異常や細胞運命決定の変化と関連付けられており、ミトコンドリア監視経路を研究するうえで有用な結節点となっています。

Nix ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BNIP3L 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BNIP3L内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BNIP3Lの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BNIP3Lが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。