NIK Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424749-ACT

Map3k14 codifica a quinase indutora de NF-κB (NIK), uma quinase de serina/treonina que atua como regulador central da via não canônica de NF-κB. A NIK integra sinais de membros selecionados da superfamília de receptores de TNF para promover a ativação de IKKα e o processamento de p100 (NF-κB2) em p52, moldando assim programas de transcrição que controlam o desenvolvimento linfoide, a sobrevivência de células B e a sinalização inflamatória. Um controle rigoroso da estabilidade e da atividade da NIK é essencial para a homeostase imune, e a sinalização desregulada NIK–NF-κB2 tem sido associada a estados inflamatórios aberrantes e a aspectos biológicos ligados a malignidades linfoides em modelos experimentais. Em sistemas murinos, Map3k14 é amplamente utilizado para dissecar a interação (crosstalk) entre a sinalização não canônica de NF-κB, redes de citocinas e decisões de destino celular em compartimentos imunes e estromais.

NIK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Map3k14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NIK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Map3k14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Map3k14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NIK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Map3k14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NIK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NIK em células tumorais com expressão de Map3k14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.