Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404001-ACT

O CHRND codifica a subunidade delta do recetor nicotínico de acetilcolina (nAChR) do tipo muscular, um canal iónico regulado por ligando que se monta na junção neuromuscular para mediar uma transmissão sináptica rápida. Após a ligação da acetilcolina, o recetor abre-se para permitir o influxo de catiões, acoplando a neurotransmissão à despolarização da membrana e aos processos de excitação–contração. O CHRND contribui para a montagem do recetor, a abertura/fecho do canal (gating) e a estabilidade pós-sináptica nas vias de sinalização colinérgica. Alterações na composição ou na função das subunidades do nAChR são relevantes para perturbações da transmissão neuromuscular, sustentando a sua utilização em estudos de biologia da sinapse e biogénese de recetores.

Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRND sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRND em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRND, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRND nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND em células tumorais com expressão de CHRND silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.