Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401641-ACT

CHRNB2 codifica a subunidade β2 dos receptores nicotínicos neuronais de acetilcolina (nAChRs), canais catiônicos controlados por ligante que se montam com subunidades α para regular a excitabilidade da membrana e a sinalização dependente de cálcio. Os nAChRs que contêm β2 conectam a neurotransmissão colinérgica a vias a jusante que influenciam a plasticidade sináptica, a liberação de neurotransmissores e a modulação de circuitos no sistema nervoso central. Alterações na expressão de CHRNB2 ou na composição do receptor têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, incluindo dependência de nicotina e suscetibilidade a convulsões, refletindo seu papel no equilíbrio excitatório/inibitório. Como subunidade de um receptor de membrana, CHRNB2 também é relevante para estudos de montagem do receptor, tráfego e sensibilidade farmacológica em redes de sinalização colinérgica.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRNB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRNB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRNB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRNB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 em células tumorais com expressão de CHRNB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.