Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402753-LAC

CHRNA9 codifica a subunidade alfa 9 do receptor nicotínico de acetilcolina, um componente de canal iônico regulado por ligante que se monta com subunidades parceiras para mediar o fluxo de cátions evocado pela acetilcolina e a sinalização subsequente dependente de Ca2+. A atividade do receptor associada a CHRNA9 influencia a excitabilidade da membrana, a sinalização colinérgica sináptica e não neuronal e a modulação de respostas celulares por meio de vias acopladas à homeostase iônica e a cascatas de segundos mensageiros. Em tecidos humanos, alterações na expressão de CHRNA9 ou na função do receptor têm sido associadas à biologia sensorial e inflamatória e foram estudadas no contexto de fenótipos de sinalização relacionados ao câncer e de outros distúrbios envolvendo vias colinérgicas desreguladas. Como resultado, CHRNA9 é um alvo útil para dissecar a composição de subunidades de receptores nicotínicos, programas transcricionais dependentes de estímulo e transições de estado celular impulsionadas por sinais colinérgicos.

As Partículas de Ativação Lentivirais Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CHRNA9 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CHRNA9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CHRNA9 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.