Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402753-NIC

CHRNA9は、ニコチン性アセチルコリン受容体のα9サブユニットをコードしている。この受容体はリガンド作動性の陽イオンチャネルで、（多くの場合α10とともに）機能的受容体を形成し、コリン作動性シグナルを膜の脱分極およびCa²⁺依存性シグナル伝達へと結び付ける。ヒト組織では、α9含有nAChRが興奮性や細胞内カルシウム動態を調節し、MAPK/ERKなどの下流経路や、活動依存的な転写プログラムに影響を及ぼす。CHRNA9の発現は、聴覚有毛細胞の生理を含む感覚系および上皮系の文脈で研究されてきたほか、細胞間コミュニケーションやストレス応答に関与する、より広範なコリン作動性シグナル伝達ネットワークとの関連でも検討されている。疾患志向の研究領域においてCHRNA9の制御異常が報告されており、ヒトモデル系でコリン作動性イオンチャネルの生物学的機構を解明するための標的としての有用性が支持されている。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRNA9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRNA9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNA9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNA9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。