Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402753-ACT

CHRNA9 codifica a subunidade alfa 9 do receptor nicotínico de acetilcolina, um componente de canal iônico dependente de ligante que forma receptores funcionais (frequentemente com CHRNA10) para mediar a sinalização colinérgica e o fluxo rápido de cátions através da membrana plasmática. Por meio da abertura do canal dependente de acetilcolina, CHRNA9 influencia a excitabilidade de membrana, cascatas de sinalização dependentes de cálcio e programas transcricionais a jusante que moldam a comunicação celular. Em contextos não neuronais, a sinalização por receptores nicotínicos tem sido associada à regulação da proliferação, diferenciação e sinalização inflamatória, posicionando CHRNA9 como um nó útil para estudar vias de canais iônicos acopladas a estímulos. Alterações na expressão ou na sinalização de CHRNA9 têm sido associadas a fenótipos relevantes para doenças descritos na biologia sensorial e em comportamentos celulares relacionados ao câncer, o que sustenta sua investigação em modelos mecanísticos.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRNA9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRNA9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRNA9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRNA9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 em células tumorais com expressão de CHRNA9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.