Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402753-ACT

CHRNA9 codifica la subunità alfa 9 del recettore nicotinico dell’acetilcolina, un componente di canale ionico a gating da ligando che forma recettori funzionali (spesso insieme a CHRNA10) per mediare la segnalazione colinergica e il rapido flusso di cationi attraverso la membrana plasmatica. Attraverso l’apertura del canale dipendente dall’acetilcolina, CHRNA9 influenza l’eccitabilità di membrana, le cascate di segnalazione dipendenti dal calcio e i programmi trascrizionali a valle che modellano la comunicazione cellulare. In contesti non neuronali, la segnalazione dei recettori nicotinici è stata collegata alla regolazione di proliferazione, differenziamento e segnalazione infiammatoria, rendendo CHRNA9 un nodo utile per studiare vie di canali ionici accoppiate a stimoli. Un’espressione o una segnalazione alterata di CHRNA9 è stata associata a fenotipi rilevanti per la malattia riportati nella biologia sensoriale e in comportamenti cellulari legati al cancro, supportandone lo studio in modelli meccanicistici.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHRNA9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHRNA9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHRNA9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHRNA9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 nelle cellule tumorali con espressione di CHRNA9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.