Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416614-ACT

CHRNA7 codifica la subunità α7 del recettore nicotinico dell’acetilcolina, un canale cationico omopentamerico attivato da ligando che media un rapido ingresso di Ca²⁺ in risposta alla segnalazione colinergica. Nei neuroni e nelle cellule immunitarie, l’attività del recettore nAChR α7 influenza l’eccitabilità di membrana e le cascate di segnalazione calcio-dipendenti che modulano la plasticità sinaptica, il rilascio di neurotrasmettitori e programmi trascrizionali legati alla via colinergica anti-infiammatoria. La segnalazione del calcio regolata da CHRNA7 si interfaccia con processi associati a MAPK/ERK, JAK/STAT e NF-κB, con effetti sulla produzione di citochine e sulle risposte cellulari allo stress. Varianti genetiche e un’alterata espressione di CHRNA7 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e del neurosviluppo; inoltre, la segnalazione colinergica disregolata è studiata anche in contesti di infiammazione e neurodegenerazione.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHRNA7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHRNA7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHRNA7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHRNA7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 nelle cellule tumorali con espressione di CHRNA7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.