Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416614-ACT

CHRNA7 codifica a subunidade α7 do receptor nicotínico de acetilcolina, um canal catiônico homopentamérico ativado por ligante que medeia um rápido influxo de Ca²⁺ em resposta à sinalização colinérgica. Em neurônios e células imunes, a atividade do nAChR α7 influencia a excitabilidade da membrana e cascatas de sinalização dependentes de cálcio que moldam a plasticidade sináptica, a liberação de neurotransmissores e programas transcricionais ligados à via colinérgica anti-inflamatória. A sinalização de cálcio regulada por CHRNA7 interage com processos associados a MAPK/ERK, JAK/STAT e NF-κB, impactando a produção de citocinas e as respostas celulares ao estresse. Variações genéticas e alterações na expressão de CHRNA7 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, e a sinalização colinérgica desregulada também é estudada em contextos de inflamação e neurodegeneração.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRNA7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRNA7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRNA7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRNA7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 em células tumorais com expressão de CHRNA7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.