Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401582-ACT

CHRNA3 codifica a subunidade α3 dos receptores nicotínicos neuronais de acetilcolina, canais catiônicos regulados por ligante que mediam a transmissão sináptica rápida e regulam a excitabilidade da membrana por meio do influxo de Na⁺ e Ca²⁺. Os nAChRs que contêm α3 são proeminentes em gânglios autonômicos e em circuitos neuronais selecionados, onde influenciam a liberação de neurotransmissores, a sinalização dependente de cálcio e a expressão gênica dependente de atividade. Por meio da sinalização colinérgica, CHRNA3 contribui para vias que controlam a diferenciação neuronal, a plasticidade sináptica e o acoplamento estímulo-secreção. Estudos genéticos e de expressão associaram variações no lócus CHRNA3 e alterações na atividade do receptor à dependência de nicotina e a outros fenótipos neuropsiquiátricos, sustentando sua relevância na biologia da adição e na pesquisa sobre a função de neurocircuitos.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRNA3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRNA3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRNA3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRNA3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 em células tumorais com expressão de CHRNA3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.