Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2CRISPR激活质粒(h): sc-403376-ACT

CHRNA2 编码神经元型烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）的 α2 亚基。nAChR 是配体门控阳离子通道，通常以五聚体形式组装，介导快速的胆碱能神经传递。乙酰胆碱或尼古丁与受体结合后，含 CHRNA2 的受体促进 Na⁺ 和 Ca²⁺ 内流，从而影响膜兴奋性以及活动依赖性的信号通路，进而塑造突触可塑性与神经回路动态。在中枢神经系统中，nAChR 亚基组成的改变可调节神经递质释放，并影响下游依赖钙的转录调控程序。围绕 CHRNA2 的遗传变异与表达改变，研究者已在神经精神和神经发育相关表型背景下开展了探索；在这些疾病相关的神经网络功能中，胆碱能信号的扰动被认为与发病机制相关。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CHRNA2的表达。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CHRNA2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CHRNA2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CHRNA2位点，并能够研究内源性位点上依赖于Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CHRNA2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。