NHE-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404829

概要

SLC9A6は、エンドソーム膜に局在するNa⁺/H⁺交換輸送体NHE-6をコードしており、オルガネラのpHおよびイオン恒常性を制御する主要な調節因子として、エンドソーム成熟、受容体のリサイクリング、ならびに小胞輸送を支えています。NHE-6は内腔側のプロトン勾配を調節することで、成長因子シグナル伝達、膜タンパク質のソーティング、リソソーム関連分解経路などのプロセスに影響を及ぼします。神経細胞では、SLC9A6の活性はシナプス発達や細胞内輸送と密接に関わっており、その機能不全は神経発達表現型やX連鎖症候群性知的障害と関連づけられています。これらの特徴により、NHE-6はヒト細胞モデルにおけるエンドソーム生物学、シグナル伝達ダイナミクス、ならびに遺伝子型—表現型の機序を研究する上で有用な結節点となります。

NHE-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC9A6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC9A6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC9A6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NHE-6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NHE-6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC9A6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NHE-6の機能に不可欠なSLC9A6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC9A6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NHE-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNHE-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC9A6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NHE-6 HDRプラスミド（h）および NHE-6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC9A6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC9A6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。