NG2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400699-ACT

CSPG4 codifica o proteoglicano transmembranar de sulfato de condroitina NG2 (também conhecido como HMW-MAA), um recetor associado à matriz pericelular que regula a adesão, a migração e a proliferação celulares. O NG2 participa em redes de sinalização ligadas a integrinas/FAK, PDGFR e à remodelação do citoesqueleto, influenciando as interações com a matriz extracelular e a plasticidade celular. No sistema nervoso, é um marcador definidor das células precursoras de oligodendrócitos e modula processos relacionados com a mielinização, enquanto noutros tecidos sustenta comportamentos de células perivasculares e do estroma. A expressão desregulada de CSPG4/NG2 tem sido associada a alterações da invasividade e das interações com o microambiente em múltiplos contextos tumorais, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos do estado de linhagem e da sinalização célula–matriz.

NG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CSPG4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CSPG4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CSPG4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NG2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CSPG4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NG2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NG2 em células tumorais com expressão de CSPG4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.