NFS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403102-ACT

ヒトNFS1は、ミトコンドリアにおける鉄–硫黄（Fe–S）クラスター生合成を支えるため、L-システインから硫黄を動員するシステイン脱硫酵素をコードしており、中核的なアセンブリー機構におけるパートナータンパク質と協働して機能します。Fe–S依存性酵素の成熟を可能にすることで、NFS1は酸化的リン酸化、リポ酸依存性のミトコンドリア代謝、ならびにレドックス恒常性に影響を与え、下流ではDNA複製・修復や細胞ストレス応答にも作用します。Fe–Sクラスター組み立ての攪乱は呼吸鎖機能や代謝酵素活性を低下させ得るため、NFS1により制御される経路は、さまざまな疾患関連の文脈で研究されているミトコンドリア機能不全やゲノム安定性に関する表現型と結び付けられます。ミトコンドリア補因子生合成の中枢ノードとして、NFS1は代謝的脆弱性、酸化ストレス、増殖状態の変化を扱うモデルで頻繁に検討されています。

NFS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NFS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NFS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NFS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNFS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NFS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNFS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNFS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNFS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNFS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。