NFATc3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400339-ACT

NFATC3は、カルシウム／カルシニューリンによって制御される転写因子NFATc3をコードしており、NFATc3は核内へ移行して、刺激依存的な遺伝子発現プログラムを統合的に制御します。NFATc3は、T細胞受容体やその他の免疫受容体経路からのシグナルを、MAPKやAP-1からの入力と統合し、サイトカイン産生、分化、および細胞の活性化状態の制御に関与します。免疫系細胞にとどまらず、NFATc3はカルシウム依存性の転写ネットワークを介して、心血管系や神経系の文脈における転写制御にも寄与します。NFATシグナル伝達の破綻は炎症性の病態生理やがん関連表現型と関連づけられており、NFATC3はシグナルから転写への結合（カップリング）の機構研究に有用なノードとなります。

NFATc3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NFATC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NFATc3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NFATC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNFATC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NFATc3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNFATC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNFATc3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNFATC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNFATc3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。