NFAT5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401359-ACT

NFAT5（nuclear factor of activated T cells 5）は、tonicity-responsive enhancer binding protein（浸透圧応答性エンハンサー結合タンパク質）としても知られるRelファミリーの転写因子であり、ヒト細胞における浸透圧適応遺伝子プログラムを統括します。高張ストレス下でイオン恒常性とプロテオスタシスを維持するため、トランスポーター、シャペロン、代謝酵素などの発現を制御し、p38/MAPK、JNK、カルシウム依存性経路からのシグナルを統合します。NFAT5の活性は、免疫系、腎髄質、上皮などの文脈における細胞の生存・増殖・分化に影響し、その制御異常は炎症性シグナル、組織ストレス応答、ならびに不利な微小環境への腫瘍細胞の適応と関連づけられています。浸透圧およびストレス応答性転写の中心的メディエーターとして、NFAT5はサイトカイン制御、バリア機能、細胞のレジリエンス機構における役割の観点から広く研究されています。

NFAT5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NFAT5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NFAT5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NFAT5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNFAT5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NFAT5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNFAT5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNFAT5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNFAT5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNFAT5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。