Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NF90 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402626-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- NF90 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- NF90ダブルニカースプラスミド（h）およびNF90ダブルニカースプラスミド（h2）は、ILF3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: NF90 抗体 (A-3): sc-377406
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
NF90 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402626-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NF90 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402626-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ILF3はNF90をコードする二本鎖RNA結合タンパク質であり、しばしばNF45や他のリボヌクレオタンパク質パートナーと協調して、mRNAの安定性、スプライシング、核外輸送、翻訳を調節することで転写後の遺伝子発現制御に機能します。NF90は、インターフェロン関連転写産物やRNA代謝経路に影響を与えることで、自然免疫の抗ウイルス応答やストレス適応プログラムに関与し、さらに増殖関連mRNAを選択的に制御することで細胞周期制御にも影響し得ます。転写およびRNAプロセシング機構との相互作用を通じて、NF90は増殖、分化、細胞性ストレスシグナルに結び付いた遺伝子発現プログラムの協調に寄与します。ILF3/NF90の制御異常は、腫瘍生物学や炎症性表現型に関連する文脈でRNA恒常性の変化と関連付けられており、RNA駆動型の制御機構を解明する研究における有用な結節点となります。
NF90 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ILF3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ILF3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ILF3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ILF3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。