Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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NF-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421882
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NF-L O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico NF-L, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NF-L Anticorpo (8A1): sc-20012
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NF-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421882 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Nefl codifica o polipeptídeo leve do neurofilamento (NF-L), uma proteína central de filamento intermediário que se polimeriza com outras subunidades de neurofilamento para formar o citoesqueleto axonal. A NF-L sustenta o calibre do axônio, a estabilidade mecânica e o transporte a longas distâncias ao organizar redes de filamentos que fazem interface com o tráfego dependente de microtúbulos e de actina. A montagem dos neurofilamentos e a dinâmica de fosforilação contribuem para a maturação e a manutenção neuronais, ligando a função de Nefl a vias que governam a remodelação do citoesqueleto e a integridade axonal. A desregulação da homeostase dos neurofilamentos é amplamente relevante para pesquisas em neurodegeneração e neurotrauma, nas quais alterações na abundância e na organização da NF-L refletem estresse e degeneração axonal.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NF-L (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Nefl em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Nefl, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Nefl na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NF-L.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Nefl para a investigação da sinalização de NF-L, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Nefl críticos para a função NF-L
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Nefl para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo NF-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo NF-L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Nefl. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo NF-L Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR NF-L (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Nefl para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Nefl definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.