neuropilin-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400650-NIC

NRP2はニューロピリン2をコードしており、クラス3セマフォリンおよび一部のVEGFファミリーリガンドに結合して、ガイダンスキューや増殖因子シグナル伝達を調節する単回膜貫通型の共受容体である。ニューロピリン2は、受容体複合体の形成やPI3K–AKT、MAPKシグナル伝達などの下流経路を制御することで、軸索誘導、リンパ管新生、血管リモデリングに関与する。免疫系および間質系のコンパートメントでは、プレキシンやVEGFRとの状況依存的な相互作用を介して、細胞移動、接着、組織パターニングに影響を及ぼし得る。NRP2の発現やシグナル伝達の変化は、複数の疾患文脈において血管新生／リンパ管関連プログラムの破綻や浸潤性表現型と関連づけられており、微小環境シグナルの機序研究における一般的な標的となっている。

neuropilin-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NRP2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NRP2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NRP2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NRP2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。