neuroglobin Double Nickaseプラスミド (m): sc-425686-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- neuroglobin Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- neuroglobinダブルニカースプラスミド（m）およびneuroglobinダブルニカースプラスミド（m2）は、Ngbを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
neuroglobin Double Nickaseプラスミド (m) | sc-425686-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
neuroglobin Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-425686-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのNgbはニューログロビンをコードしており、ニューロンに豊富に発現するヘム結合性グロビンとして、代謝需要が変動する状況下での細胞内酸素の取り扱いとレドックス恒常性の維持を支えます。ニューログロビンは、活性酸素種（ROS）および活性窒素種（RNS）を調節することでミトコンドリアのストレス応答に関与し、低酸素および再酸素化の際に呼吸鎖機能を保護することと関連づけられています。神経組織では、Ngbの発現はアポトーシス、酸化的リン酸化、一酸化窒素（NO）シグナル伝達を制御する経路と相関しており、ニューロンの脆弱性や適応的なレジリエンスを研究するうえで重要です。ニューログロビンの制御異常は、酸化ストレスとミトコンドリア機能障害が病態に寄与する虚血性障害や神経変性過程のモデルにおいて検討されています。
neuroglobin ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Ngb 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Ngb内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Ngbの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Ngbが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。