neurexin I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401872

Panoramica

NRXN1 codifica la neurexina I, una molecola di adesione cellulare presinaptica che organizza la formazione e la maturazione delle sinapsi interagendo con partner postsinaptici come le neuroligine e le LRRTM. Grazie allo splicing alternativo e alla diversità di isoforme, la neurexina I modella l’equilibrio tra sinapsi eccitatorie e inibitorie, regola la probabilità di rilascio dei neurotrasmettitori e supporta la segnalazione trans-sinaptica importante per la connettività delle reti neuronali. La funzione di NRXN1 si intreccia con vie che governano il ciclo delle vescicole sinaptiche, l’esocitosi calcio-dipendente e la plasticità sinaptica dipendente dall’attività. L’alterazione genetica o le variazioni del numero di copie (CNV) di NRXN1 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, rendendolo un locus chiave per studi meccanicistici nei sistemi neuronali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO neurexin I (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NRXN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NRXN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NRXN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina neurexin I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NRXN1 per lo studio della segnalazione di neurexin I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NRXN1 critici per la funzione di neurexin I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NRXN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal neurexin I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal neurexin I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NRXN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal neurexin I Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR neurexin I (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NRXN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NRXN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.