Neuregulin-1/NRG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431734-ACT

A neuregulina-1 (NRG1) é um fator de crescimento do tipo EGF, associado à membrana e também secretado, que sinaliza principalmente por meio das tirosina-quinases receptoras ERBB3/ERBB4 para regular a comunicação célula–célula no sistema nervoso e em outros tecidos. Em camundongos, Nrg1 contribui para o desenvolvimento neuronal, a maturação sináptica, a mielinização por células de Schwann e as interações neurogliais, integrando-se às vias PI3K–AKT, MAPK/ERK e a programas transcricionais a jusante que moldam a diferenciação e a sobrevivência celular. A atividade de NRG1 influencia a formação e a plasticidade de circuitos e é amplamente utilizada como um ponto de entrada molecular para estudar a sinalização axônio–glia e o remodelamento dependente de atividade. A desregulação da sinalização Nrg1/ERBB tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, bem como a alterações na biologia dos nervos periféricos, reforçando sua relevância em modelos mecanísticos de doenças.

Neuregulin-1/NRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nrg1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neuregulin-1/NRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nrg1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nrg1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neuregulin-1/NRG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nrg1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neuregulin-1/NRG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neuregulin-1/NRG1 em células tumorais com expressão de Nrg1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.