NEPH3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406190

Visão geral

KIRREL2 codifica a NEPH3, uma molécula de adesão da superfamília das imunoglobulinas enriquecida em junções especializadas célula–célula, onde sustenta a formação e a manutenção de estruturas semelhantes ao diafragma de fenda e a organização da barreira epitelial. A NEPH3 participa de sinalização dependente de contato e de remodelamento do citoesqueleto por meio de interações com proteínas de ancoragem (scaffold) que coordenam a dinâmica da actina e a estabilidade dos complexos juncionais. Em contextos relevantes para o rim, complexos associados à NEPH3 estão ligados à arquitetura dos podócitos, à integridade da barreira de filtração e às respostas celulares a estresse mecânico ou inflamatório. A desregulação das redes de adesão da família NEPH tem sido associada à patologia glomerular e à diferenciação epitelial alterada, tornando KIRREL2 um alvo útil para estudar a sinalização em junções e a homeostase tecidual.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NEPH3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene KIRREL2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do KIRREL2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do KIRREL2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NEPH3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de KIRREL2 para a investigação da sinalização de NEPH3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) KIRREL2 críticos para a função NEPH3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos KIRREL2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NEPH3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NEPH3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus KIRREL2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NEPH3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NEPH3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia KIRREL2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo KIRREL2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.